产品简介
在分子生物学实验中通常要使用有机苯酚用于核酸的提取及纯化。但是工业生产的初级结晶苯酚通常含有杂质及氧化产物,而这些东西是会严重影响核酸的质量的,因此苯酚在使用前必须经过蒸馏以去除苯酚中的杂质及氧化产物。但是由于苯酚的沸点是181.8℃左右,且又是一种强烈腐蚀性易挥发的化学试剂,所以在做苯酚溶液的过程是一项耗时又危险的过程,且在做的过程中的预防措施比如戴防护眼镜、手套,通风柜等都是必须的。苯酚溶液在生产过程中还需要调整pH值。
我们所提供的产品中包含平衡酚、预混合酚、饱和酚等,及严格的质量控制,为客户避免了这些处理问题,并提供了一个更加方便、安全和容易选择的酚溶液。
核酸提取过程
通常用一系列有特定pH的酚和酚:氯仿试剂抽提细胞、组织、细菌、病毒、真菌、植物等中的核酸,苯酚和氯仿都能使蛋白质变性,并使其溶于有机相或中间相内,而核酸只溶于水相,在离心之后溶于水相的核酸可再次用等体积的氯仿:异戊醇抽提(1,2,3)。以上这些抽提步骤主要是考虑到减少RNA的损失,由于不溶性蛋白与mRNA的复合物主要存在于中间相内。氯仿能增加核酸的提取效率,主要是氯仿能减少mRNA在中间相的损失。氯仿的作用是能使不溶性蛋白变性并能帮助去除脂类,因而能促进核酸在水相内的分布,相分离也就能提高,使水相能尽量减少与有机相的交叉污染。通常异戊醇也会被加入到酚:氯仿中以减少乳化现象。
不同pH酚的应用
在不同的酚pH下,DNA即会被分配到有机相也会被分配到水相(5,6),因此正确的确定酚的pH值是必须的。然而精确测量有酚或酚:氯仿溶液的pH是非常困难的(2)。标准参控电极能检测电极的氯化钾填充液与待检样品间的液体接界电势,但是象苯酚和氯仿等有机液体和水相比有非常低的介电常数,因而液体接界电势也会非常大,一个非常大的液体接界电势能使pH值漂移。检测时长时间稳定对pH电极的损害也很大,因此pH试纸经常被用来检测苯酚溶液,然而苯酚能破坏pH试纸的化学指示剂,使得pH测量不准确。要准确检测酚溶液的pH,我们有特殊的方法来准确检测酚溶液的pH。
不同pH酚的选择
为了选择最适合你应用的酚溶液,就必须理解在核酸提取中pH对酚功能的影响,DNA是依靠pH来分配的,在pH7.0或者更高时DNA和RNA都被分配到水相中,在酸性pH,低于pH7.0时,DNA会被变性并被分配到有机相和中间相,只剩RNA存在于水相。在很多DNA提取过程中使用pH8.0的酚:氯仿:异戊醇。在需要去除大部分的DNA 以提取纯的总RNA时,可以使用酸性酚或酸性酚:氯仿溶液。氯仿能帮助减少mRNA的损失,由于mRNA与不溶蛋白的复合物会被分配到中间相内。(当提取的总RNA中有少量基因组DNA的污染时对Northern blotting、nuclease protection assays的结果是不会有影响)
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